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以下是植物6-磷酸山梨醇脫氫酶(S6PDH)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合整理:
BS-5024 植物6-磷酸山梨醇脫氫酶(S6PDH)ELISA試劑盒
一、試劑盒基本參數(shù)
規(guī)格?:常見(jiàn)為96T/48T兩種包裝?
保存條件?:2-8℃避光保存,避免反復(fù)凍融?
保質(zhì)期?:通常為6個(gè)月?
適用樣本?:血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等生物液體?
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
自備器材?:
酶標(biāo)儀(需支持340nm波長(zhǎng)檢測(cè))?
離心機(jī)(8000g能力)?
恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱(37℃)?
微量移液器及無(wú)菌槍頭?
樣本處理?:
組織樣本?:按1:10比例(0.1g組織+1mL提取液)冰浴勻漿,8000g離心10min取上清?
細(xì)胞樣本?:每500萬(wàn)細(xì)胞加1mL提取液超聲破碎(功率20%,3s間隔10s,重復(fù)30次)?
液體樣本?:血清/血漿可直接檢測(cè),避免使用含NaN3的樣本?
三、實(shí)驗(yàn)操作流程
試劑配制?:
溶解凍干粉試劑(使用前加2mL蒸餾水現(xiàn)配現(xiàn)用)?
工作液按試劑一:二:三=110:20:20比例混合?
檢測(cè)步驟?:
酶標(biāo)儀預(yù)熱30分鐘,設(shè)置340nm檢測(cè)波長(zhǎng)?
每孔加入100μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品?
37℃孵育30-60分鐘(具體時(shí)間參考各品牌說(shuō)明書(shū))?
洗滌5次后加入底物顯色?
四、注意事項(xiàng)
避免樣本反復(fù)凍融?
含NaN3的樣本會(huì)抑制HRP酶活性,需提前處理?
建議先做2個(gè)樣本預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件?
不同物種(人/大鼠/植物等)需確認(rèn)試劑盒適用性?
五、結(jié)果計(jì)算
通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中S6PDH濃度,單位通常定義為每分鐘催化生成1nmol NADPH的酶量為1個(gè)活力單位?。具體計(jì)算公式需參照試劑盒說(shuō)明書(shū)?。
(說(shuō)明:不同品牌試劑盒可能存在操作細(xì)節(jié)差異,建議以實(shí)際購(gòu)買產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)?)
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